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熒光定量PCR儀(yi) 如何實現對PCR產(chan) 物的實時監測?
熒光定量PCR儀如何實現對PCR產物的實時監測?
更新日期:2024-03-07 點擊次數:804
熒光定量PCR儀
是一種用於實時監測PCR擴增過程中產物的儀器。其原理基於熒光染料或探針與目標DNA序列結合後產生的熒光信號,通過實時檢測熒光強度的變化,可以實現對PCR產物的實時監測和定量分析。
熒光定量PCR儀
的主要組成部分包括光學係統、溫度控製係統、樣品處理係統和數據處理係統。以下是其實現對PCR產物實時監測的過程:
1、熒光染料或探針的選擇:熒光定量PCR實驗中,需要選擇合適的熒光染料或探針與目標DNA序列特異性結合。常用的熒光染料有SYBRGreenI和SYBRGold,它們能非特異性地結合到雙鏈DNA上,發出熒光信號。而探針類熒光標記物如TaqMan探針、MolecularBeacon等,則是通過特異性地結合到目標DNA序列上,發出熒光信號。
2、樣品製備:將待測樣本、引物、熒光染料或探針、PCR反應液等混合在一起,加入到PCR管中。然後將PCR管放入熒光定量PCR儀的樣品槽中。
3、PCR循環過程:溫度控製係統會按照預設的程序,對樣品進行升溫、降溫,實現PCR循環過程中的變性、退火和延伸階段。在每個循環的退火和延伸階段,光學係統會激發熒光染料或探針產生熒光信號,並通過檢測器實時檢測熒光強度。
4、數據處理與分析:數據處理係統會實時記錄每個循環中熒光信號的變化,並將其轉化為擴增曲線。通過對擴增曲線進行分析,可以得到目標DNA序列的起始拷貝數、擴增效率等信息,從而實現對PCR產物的定量分析。
5、結果輸出:通常會將實驗結果以表格、圖形等形式展示出來,方便實驗者進行後續分析和判斷。
總之,
熒光定量PCR儀
通過熒光染料或探針與目標DNA序列結合產生的熒光信號,實現了對PCR產物的實時監測和定量分析。這使得熒光定量PCR技術在基因表達分析、病原體檢測、遺傳變異分析等領域得到了廣泛應用。
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